吉西他滨对放射相关DNA损伤修复的影响

摘要

目的 研究吉西他滨(GEM)在体外对胰腺癌细胞的放疗增敏作用及机制.方法 体外培养胰腺癌Panc1 细胞株,将其分为空白对照组、单纯照射组、吉西他滨组及吉西他滨联合放疗组(联合放疗组).采用源皮距(SSD)为100 cm,剂量2、4和6Gy的4MV-X线进行细胞照射;运用MTT实验方法选出细胞生长抑制率≤10％的药物浓度(IC10),即GEM的最佳实验浓度;克隆形成实验观察空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组胰腺癌细胞Panc1体外增殖情况.流式细胞仪分析上述各组细胞的细胞周期和凋亡改变.免疫印迹法分别检测空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组DNA损伤以及损伤修复指标γ-H2AX、Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达.结果 GEM在体外具有放射增敏作用.MTT结果显示,GEM在0.04～0.06μmol/L之间为最佳实验浓度.射线照射后,GEM能显著降低胰腺癌细胞的克隆形成能力,即增殖能力.凋亡结果显示,与GEM组及单独放疗组比较,联合放疗组Panc1细胞的凋亡数明显增加,其凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期检测结果表明,GEM作用于胰腺癌细胞后,S期细胞水平明显升高.胰腺癌细胞DNA损伤指标γ-H2AX蛋白表达水平在GEM组,单纯放疗组及联合放疗组均增加,联合放疗组较GEM组有进一步升高.与空白对照组、单纯照射组、GEM组比较,联合放疗组胰腺癌细胞中DNA损伤修复指标Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达均降低.结论 GEM对胰腺癌放射治疗有增敏作用.其机制涉及诱导细胞凋亡,改变Panc1细胞生长周期,并通过抑制射线照射后胰腺癌细胞DNA损伤修复,间接对胰腺癌的放疗起增敏作用.