老年小鼠ADSCs与BMSCs外泌体的蛋白质组学分析研究

摘要

目的 通过无标记定量(Label-free)Label-free蛋白质组学分析老年No.57雄鼠和No.52雌鼠交配获得第六组亚系小鼠(C57BL/6)脂肪间充质干细胞(ADSCs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体,探讨其细胞治疗的可行性.方法 利用梯度密度离心-速差贴壁法分离、培养源于老年C57B/L6小鼠的ADSCs和BMSCs,通过超速离心法提取外泌体,对外泌体进行透射电镜下的形态观察,通过Western blot检测外泌体动力相关蛋白-1(CD9)、溶酶体颗粒膜蛋白(CD63)、四跨膜蛋白(CD81)的表达.并通过Label-free蛋白质组学分析ADSCs和BMSCs外泌体.结果 成功获取老年C57B/L6小鼠的ADSCs和BMSCs,透射电镜结果和Western blot结果显示成功获取外泌体;Label-free蛋白质组学分析结果显示ADSCs外泌体较BMSCs外泌体含有更多的金属硫蛋白(MTI)、克拉拉细胞蛋白(CC16)等;经通路分析显示,ADSCs外泌体在抗炎反应等信号通路变化有关,Western blot结果显示MTI在ADSCs外泌体的表达高于BMSCs外泌体.结论 老年C57B/L6小鼠的ADSCs较BMSCs外泌体含有更多的MTI,可能为老年供体来源ADSCs外泌体应用于抗炎治疗提供实验依据及奠定理论基础.