人胚胎干细胞的体外原代培养条件分析

摘要

目的:探讨人胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES cells)的体外原代培养条件及相关影响因素.方法:分别从标本的取材、胰蛋白酶的浓度及消化时间、培养基中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)的浓度等方面来观察人ES细胞的原代培养条件,并对其进行碱性磷酸酶染色鉴定.结果:药物流产且胎龄在5～10周及人工流产且胎龄小于5周者,其胚胎的完整率较高.采用0.125%胰蛋白酶室温下消化3～5 min,有较高的克隆形成率.为防止ES细胞过早分化,培养基中LIF的浓度应在5～10 ng*ml-1之间.结论:人ES细胞原代培养的取材应以人工流产且胎龄在5周以下、及药物流产且胎龄在5～10周者为主,以0.125%胰蛋白酶室温下消化胚胎组织3～5 min,培养基中LIF的浓度应在5～10 ng*ml-1之间,这样有利于提高ES细胞培养的成功率并抑制其过早分化.