人脐带Wharton胶中间充质干细胞的分离、培养与鉴定

摘要

目的 研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性.方法 去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细胞生长动力学研究,流式细胞仪分析细胞表面分子特点,组织化学和免疫组化染色鉴定软骨特征性标志物表达情况.RT-PCR检测Sox-9及Col-2A1 mRNA表达情况.结果 采用酶消化法可以快速分离Wharton胶中MSCs,且细胞迅速贴壁生长;组织块法培养获得种子细胞时间较长.流式细胞仪检测显示所获得的细胞表达CD44、CD105等MSCs标志物,HLA-ABC表达阳性,HLA-DPDQDR表达阴性.经过冻存复苏后免疫表型无显著变化.组织化学和免疫组化染色显示脐带Wharton胶MSCs弱表达软骨特征性标志.RT-PCR显示Wharton胶MSCs表达Sox-9和Col-2A1.结论 人脐带Wharton胶MSCs不向造血系分化,且具有前软骨细胞的特性,有望作为软骨组织工程新型的种子细胞.