一种高效扩增人T细胞受体α链可变区基因方法的建立

摘要

目的 建立一种高效扩增人T细胞受体(TGR)α链可变区(Vα)基因的方法. 方法 根据TCR Vα 32个亚家族的基因序列特点,设计扩增Vα基因的上游内、外引物各42条,并将上游内、外引物各分为5组简并引物.在恒定区(C区)设计下游内、外引物,测序引物以及扩增Cα基因的上游引物各1条.提取细胞RNA,用PolyA介导反转录后,采用巢式PCR扩增正常人外周血单个核细胞(PBMC)中CD8T细胞TCR Vα的32个亚家族基凶,以JurkatT淋巴瘤细胞作为对照.用T-easy载体克隆RT-PCR产物,对克隆基因进行测序分析. 结果 从正常人CD8 T细胞中扩增到了所有TCR Vα亚家族基因,以10个Jurkat细胞所提取的RNA作为模板即可获得成功扩增.TCR Vα同一亚家族基因的同源性均大于75%,序列差异主要在CDR3高变区. 结论 建立了一种高效灵敏的TCR Vα编码基因扩增方法,为抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的TCR克隆和功能研究打下了良好基础.