一种用于上调内源性人SOD1表达多肽筛选的随机文库及细胞系的构建

摘要

目的 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪物,建立一种简便、经济、有效的随机多肽文库,为进一步筛选出可上调内源性人SOD1表达多肽的药物奠定基础.方法 采用点突变技术,在pET-14b-His-Tat-EGFP载体多克隆位点Xho I之后插入12个随机多肽的36个随机碱基序列.用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM) 2000包裹已构建的重组质粒pDsRed1-1-SOD1p后.转染NIH/3T3细胞,荧光显微镜观察SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的表达.用G418筛选稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的细胞系,荧光显微镜检测红色荧光蛋白的表达及定位.结果 在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库理论上至少包含了107个独立克隆,且几乎所有克隆插入的随机片段都是36个碱基.稳定转染3个月后,重组质粒转染的细胞质及细胞膜上均有携带SOD1启动子的红色荧光蛋白的表达.结论 成功建立随机多肽表达文库,获得了稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的NIH3T3细胞系.