PCR-RFLP技术在布氏菌鉴定与分型中的应用

摘要

目的 利用PCR-RFLP技术扩增7株布氏菌临床分离株16S RNA基因片段,为该菌的分子诊断学、遗传学和流行病学研究提供实验依据.方法 参考GenBank公布的布氏菌ATCC 25840标准株序列,设计针对该菌16S RNA保守区的特异性引物,从临床分离培养7株布氏菌,提取DNA并行16S RNA片段的PCR扩增.将PCR产物克隆至PGEM-T载体进行测序并选用合适的限制性内切酶进行RFLP分析,将分析结果用于临床株的同源性及变异位点的研究,并对感染患者的临床资料进行回顾性分析,研究不同布氏菌基因型与感染患者临床特征的相关性.结果 利用PCR扩增出的目的片段与预期一致,大小约为1500bp.测序及同源性分析表明,7株临床分离株之间存在98.88%的同源性和11个变异位点.RFLP结果将7株菌分为4个基因型,临床资料回顾性分析患者不同基因型与临床表现之间无明显联系.结论 利用PCR技术扩增布氏菌16S RNA基因片段可以实现对该菌的早期诊断,为布氏菌的分子遗传学和流行病学提供依据.