Fractalkine、IP-10及不同信号通路抑制剂对肿瘤微环境中NK细胞的影响

摘要

目的 探讨Fractalkine(FKN)、干扰素诱导蛋白10(IP-10)以及不同信号通路抑制剂对肿瘤微环境自然杀伤(NK)细胞数目和功能的影响.方法 免疫组化染色观察人乳腺癌组织中CD56和DAP10的分布情况.通过共培养小鼠巨噬细胞RAW264.7与小鼠乳腺癌细胞4T1模拟体外肿瘤微环境(数目比例1∶4),以小鼠NK细胞KY-1为研究对象.RT-PCR检测肿瘤微环境中KY-1细胞表面活性受体CD16、NKG2D及NK1.1的表达;ELISA检测培养细胞上清CD107a的含量.在肿瘤微环境中加入10ng/mlFKN及10ng/ml IP-10,流式细胞术测定NK1.1+CD16+ KY-1细胞的数量;趋化及黏附实验评价其迁移和黏附功能的变化.最后,以10nmol/L雷帕霉素、30μmol/L LY294002、500ng/μl穿心莲内酯、2μmol/L渥曼青霉素分别处理4T1细胞,收集上清分别孵育RAW 264.7细胞48h后,RT-PCR检测4T1、RAW 264.7 mRNA及两种混合mRNA中Rae1 α、H60a的表达.结果 肿瘤微环境中,KY-1细胞NK1.1+细胞比例、趋化率及黏附功能明显下降,加入FKN和IP-10后以上各项指标明显增高,不同信号通路阻滞剂使4T1细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性均有不同程度提高,以雷帕霉素作用最为明显(P＜0.05).结论 FKN、IP-10可上调肿瘤微环境中NK细胞的数目和功能,雷帕霉素等通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(Rae1、H60a),间接促进NK细胞的杀伤活性.