脂多糖作用下血管内皮钙黏蛋白经网格蛋白和微囊介导胞吞后的亚细胞分布差异

摘要

目的 研究脂多糖(LPS)作用下血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)经不同的胞吞途径进入细胞后对VE-Cad亚细胞分布和细胞通透性的影响.方法 体外培养人血管内皮细胞株CRL-2922,观察LPS(10μg/ml)作用后不同时间点VE-Cad与Rab11(循环内颗粒标记物)及溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2,晚期内颗粒/溶酶体标记物)的免疫共沉淀情况,网格蛋白胞吞抑制剂和微囊抑制剂对VE-Cad与Rab 11和LAMP2免疫共沉淀的影响,以及单层细胞通透性的变化.结果 LPS作用后1h,VE-Cad与Rab 11的免疫共沉淀明显增高(P＜0.05),随后逐渐降低;VE-Cad与LAMP2的免疫共沉淀在LPS作用后呈时间依赖性地增高(P＜0.05).网格蛋白胞吞抑制剂氯丙嗪(CPZ)可显著抑制LPS作用后VE-Cad与Rab 11免疫共沉淀的增高(P＜0.05),而微囊抑制剂非律平无此作用;微囊抑制剂非律平可显著抑制LPS作用后VE-Cad与LAMP2免疫共沉淀的增高(P＜0.05),而网格蛋白胞吞抑制剂无此作用.网格蛋白胞吞抑制剂可减轻LPS作用后1h单层细胞通透性的增高,而微囊抑制剂可减轻LPS作用后4h单层细胞通透性的增高(P＜0.05).结论 在LPS作用下VE-Cad分别经网格蛋白或微囊介导的胞吞进入细胞,分布于循环内颗粒或溶酶体中,从而导致不同程度的血管通透性增高.