应用引物延伸预扩增提高微量DNA拷贝数

摘要

采用引物延伸预扩增方法,可普遍提高微量模板DNA的拷贝数,便于进行基因分析时克服标本量少、来源困难的制约.采用常规扩增、检测248 bp的DYZ1片段体系为观察对象,其最小模板量需1.5 ng/20μl体系.以15个碱基随机寡核苷酸为引物,对最小模板量进行预扩增,再以其产物1/10为模板,特异扩增DYZ1片段.进行相对定量分析,判断原模板DNA拷贝数增加的程度.结果1.5 ng男性DNA经随机扩增后,此DYZ1片段拷贝数增加了10倍以上,大大地提高了特异DNA片段扩增的模板量.表明经随机引物延伸预扩增后,微量标本DNA片段拷贝数获得普遍提高,增加了微量DNA扩增的敏感度.