Cre重组酶表达载体的构建及其在转基因小鼠胰腺中的表达

摘要

组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠是进行组织特异性条件敲除研究的关键.采用PCR扩增大鼠胰岛素基因705 bp启动子指导Cre在胰岛细胞中特异表达;同时采用改构的Cre重组酶基因,在其5'端添加有真核核糖体结合序列和核定位序列使Cre重组酶能穿越核膜在细胞核能发挥功能;同时,为了保证原核基因Cre能在真核系统顺利表达,在其3'端添加含内含子的人生长激素基因.构建的表达载体在去除原核序列后用显微注射方法建立转基因小鼠,在出生的27只仔鼠中,PCR检测共获得7只Cre整合阳性的转基因小鼠,整合率26%.这种Cre转基因小鼠与基因组上携带LoxP位点的条件基因打靶小鼠交配,在胰腺组织中可以检测到Cre介导的重组,表明Cre在转基因小鼠胰腺中有表达.