人源抗狂犬病毒单链抗体基因原核表达质粒的构建及高效表达

摘要

在原核系统中高效表达抗狂犬病毒单链抗体scFv41,以便进一步研究其生物学功能,预测临床应用前景.以重组质粒pCANTABscFv41为模板,PCR扩增带NcoI和NotI位点的scFv41基因,克隆入原核表达载体pET-22b(+),酶切鉴定重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.竞争ELISA检测表达蛋白的特异结合活性.酶切鉴定证实scFv41基因已插入原核表达载体pET-22b(+),重组表达质粒pET-scFv41在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达量约占菌体蛋白总量的30%.竞争ELISA检测结果表明scFv41表达蛋白可特异抑制抗狂犬病毒IGY与狂犬病毒的特异性结合.该实验为进一步研究scFv41的生物学特性和免疫保护作用,及基因工程抗体的制备奠定了基础.