猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

摘要

猪肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因的cDNA去除信号肽后PCR扩增出成熟蛋白编码序列1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞;筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致.将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和SalI内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了编码猪肌生成抑制素成熟蛋白的原核表达载体.LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-pAGE显示重组菌表达的MSTN蛋白以包涵体形式存在;经薄层扫描仪扫描分析SDS-PAGE凝胶,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,其相对分子质量为41 451.3.所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,HisTrap亲和柱纯化后纯度可达92.5%.该试验为获得较好的猪肌生成抑制素并制备抗体打下了良好的基础.