卷柏总蛋白质提取方法及双向电泳条件的建立

摘要

目的:建立复苏植物--卷柏总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行阵列分离的双向电泳条件.方法:通过多种条件的组合与优化,建立了以物理和化学2种方法充分裂解植物组织细胞,并采用低温操作、加入PVP等去除植物组织中大量的酚类物质,最后离心去除不溶性杂质的卷柏蛋白质组双向电泳(2-DE)样品制备方法.第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE.结果:通过对样品制备、蛋白定量、第1向和第2向电泳、染色方法等各实验环节进行控制和优化,凝胶经考马斯亮蓝染色后,可分辨蛋白质斑点数约600个.结论:建立了卷柏总蛋白质的提取方法及蛋白质组双向电泳技术,为后续研究卷柏在干旱胁迫下的差异表达奠定了基础.