灵芝子实体总蛋白质提取方法及双向电泳条件的建立

摘要

目的:建立药用真菌——灵芝子实体总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行分析的双向电泳条件.方法:通过液氮研磨, Tris-饱和酚抽提真菌细胞,并采用低温操作,最后离心去除不溶性杂质的灵芝子实体蛋白质组双向电泳(2-DE)样品制备方法。第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE.结果:通过对样品制备、蛋白定量、第1向和第2向电泳、染色方法等各实验环节进行控制和优化,凝胶经考马斯亮蓝染色后,用Image Master 2D Platinum6.0软件进行分析,可分辨蛋白质斑点数约600个.结论:建立了灵芝子实体总蛋白质的提取方法及蛋白质组双向电泳技术,为后续研究药用真菌灵芝双向性固体发酵的差异表达奠定了基础.