一种基于EGFP的、安全的抗HIV药物评价系统

摘要

目的:建立基于EGFP的、安全的抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物评价系统.方法:用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因替代HIV感染性克隆质粒pUC18-HIV-NL4-3中的部分包膜基因(env),构建重组假病毒质粒pUC18-NIA-3-EGFP,将其与水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)真核表达载体共转染人胚肾293FT细胞,观察绿色荧光蛋白的表达,同时用该细胞培养上清进一步感染其他293FT细胞培养物.为了检验该假病毒系统能否用于抗病毒药物的评价,在假病毒复制和感染过程中加入不同浓度的抗HIV药物AZT(Zidovudine),采用荧光显微镜检测和流式细胞仪定量检测,分析AZT对假病毒的抑制作用.结果:假病毒质粒pUC18-NIA-3-EGFP能够在转染细胞和再感染细胞中有效地表达绿色荧光蛋白基因,不同浓度的AZT能以剂量依赖方式抑制假病毒的感染和报告基因的表达.结论:建立了一种基于EGFP表达和检测的、安全的HIV假病毒复制和感染系统,该系统可以用于抗HIV药物的筛选和评价.