假病毒

摘要： 在当前新冠疫情大流行的过程中,出现了多种严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-Co V-2)变异株,其突变与传播增加和抗体逃逸有关。尽管目前的疫苗在很大程度上对过去的变异株有效,但在奥密克戎Omicron(B.1.1.529)刺突蛋白上发现的突变数量似乎降低了先前存在的免疫所提供的保护。

摘要： 目的体外评价Tim-1对马尔堡假病毒感染细胞的促进作用。方法通过转染MARV-GP质粒制备马尔堡假病毒,并通过瞬转Tim-1表达质粒制备高表达Tim-1的HEK-293T细胞作为靶细胞,采用生物发光法评价Tim-1及其多态性对MARV感染的促进作用,最后检测Tim-1-ECD重组蛋白对Tim-1促进作用的阻断效果。结果成功制备了马尔堡假病毒且对HEK-293T细胞有较高的感染性,Tim-1能丰度依赖性地增强马尔堡假病毒的感染。Tim-1-359aa和-364aa均有促进作用,Tim-1-359aa的增强效应强于Tim-1-364aa。Tim-1-ECD重组蛋白可显著抑制Tim-1对马尔堡假病毒感染的促进作用。结论Tim-1能够显著增强马尔堡假病毒的感染性。

摘要： 目的 在二级生物安全实验室条件下,通过构建新型冠状病毒(新冠病毒)VSV假病毒,研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法 通过购买的新冠病毒(Wuhan-Hu-1株)VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒;利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变,构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒,由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。结果 新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况,与Wuhan-Hu-1株相比,D614G株和Delta株的感染水平均明显增加(P均<0.05),同时在Calu-3和Caco-2细胞系中,Delta株的感染水平明显强于D614G株(P均<0.05)。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现,Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株(P均<0.05)。结论 新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能,并且安全可靠、易于量化、应用广泛,在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用.

摘要： 目的:制备一种应用于细胞制剂中丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒1型和2型(HIV-1/2)、人类T细胞白血病病毒1型和2型(HTLV-1/2)五种RNA病毒核酸检测的阳性质控品,即装载上述五种病毒核酸的假病毒5V(5V)。方法:将上述病毒的部分基因片段连接成一条基因,与MS2噬菌体部分基因共同插入原核表达载体中构建pACYCDuet-1-MS2/5Virus重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)感受态中表达并鉴定;表达产物纯化浓缩,电镜分析5V形态;对5V进行DNase I、RNase A抗性及保存期的稳定性试验。结果:重组基因有效表达,5V纯度高无杂带;5V成功包装目的基因序列,具有明显的病毒结构特征;5V能抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解,在-20°C稳定保存6个月。结论:制备的5V稳定,达到了作为细胞制剂中RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。

摘要： 新型冠状病毒(简称新冠病毒,2019n-CoV)标准物质是具有确定的新冠病毒序列和量值信息的一类足够均匀稳定的物质.国内外新冠病毒相关标准物质主要包括体外转录和基因组RNA标准物质、假病毒和灭活病毒标准物质,以及蛋白质类标准物质.它相当于一把"标尺",可用于新冠病毒检测试剂盒的量值溯源和方法验证、试剂盒性能评价和实验室能力验证,还可作为质控物质保证检测结果的准确性.此外,在确保全球新冠病毒测量的国际等效和国际互认中,新冠病毒标准物质也发挥了重要作用.

摘要： 目前国内外大多数针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的研究须在生物安全三级实验室(biosafety level 3 laboratories,BSL-3 labs)中进行,因此针对该病毒的感染过程、中和抗体逃逸机制、药物研发等研究受到了一定限制。鉴于此,本研究选择ASFV包膜蛋白中与其进入细胞紧密相关的蛋白p12、CD2v、p30、p54和pE248R,构建表达这5种包膜蛋白的真核表达质粒,利用水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)假病毒包装体系,制备多种ASFV假病毒。以荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)检测假病毒感染水平;选择1个包膜蛋白为代表,使用蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测其在假病毒中的表达情况;采用芫花素检测其对所建立的ASFV假病毒(p30-pE248R-ASFV-PsV)的抑制活性。结果显示,VSV包装体系以及p30、pE248R包膜蛋白质粒的组合制备方法所包装出的假病毒具有较优的感染活性,适合用于建立细胞感染模型。ASFV的包膜蛋白pE248R被有效整合到VSV-ΔG rLuc颗粒中,并包装出ASFV假病毒。芫花素可浓度依赖性地抑制ASFV假病毒感染Vero细胞,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50)为4.05±0.88μmol/L。本研究通过建立基于ASFV假病毒的细胞感染模型,筛选获得了1种可感染已报道的一些ASFV敏感细胞的假病毒。该假病毒无复制性,可在生物安全级别较低的实验室中进行操作,并且带有海肾荧光素酶报告基因,有望用于ASFV入侵抑制剂的高通量筛选及中和活性的初步评价,为研发抗ASFV药物提供了一个安全、方便的研究模型。

摘要： 新型冠状病毒肺炎是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的,其传染性高、致病性强,已在全球蔓延。核酸检测技术为新冠病人确诊和治疗提供科学依据,有效推动"早发现、早治疗、早隔离"的疫情防控策略。自新冠疫情爆发以来,我国陆续研制出来各种新型冠状病毒核酸检测试剂,为疫情防控提供了重要支撑,而新型冠状病毒核酸标准物质为核酸检测质量控制提供了有力保障。简单介绍了国内存在的3种不同形式的标准物质的原理和优缺点,列举了国内现有的新型冠状病毒核酸标准物质,对它们的研究现状及面临的挑战进行了阐述,并展望了未来的发展方向,为新冠病毒核酸标准物质的研制和使用提供了参考。

摘要： 目的 为避免西尼罗病毒(WNV)研究中活病毒所带来的安全隐患,建立WNV的假病毒报告系统,用于抗WNV药物的筛选.方法 构建含有海蜃荧光素酶报告基因的WNV复制子重组质粒prWNV-Rluc及表达WNV结构蛋白C、M和E的重组质粒pcDNA3.1-CME,并共转染293T细胞,72 h后获取含有假病毒的培养上清.结果 用上清感染BHK21细胞后,BHK21细胞产生荧光,且荧光强度与感染细胞的假病毒量呈量效关系.Western印迹法实验检测到感染的BHK21细胞表达WNV NS1蛋白,证实上清中为WN假病毒.中和实验显示WNV中和性抗体能有效阻断WN假病毒对BHK21细胞的感染.结论 建立了WNV的假病毒报告系统,规避了生物安全3级实验室(BSL-3)操作,可用于抗WNV药物的筛选.

摘要： 目的 分析发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)不同基因型和突变体的中和特性.方法 采用VSV△G-Fluc*G骨架构建SFTSV不同基因型和突变体的假病毒,建立以假病毒为基础的中和抗体检测方法.制备不同基因型DNA疫苗并免疫豚鼠采集血清.对DNA疫苗免疫后血清以及自然感染者的血清进行中和抗体检测,分析其中和特性.结果 成功构建了5个基因型和43株突变体的假病毒.通过条件优化,建立了以假病毒为基础的中和抗体检测方法.利用报告基因表达量的减少,将中和抗体对假病毒的半数感染抑制率所对应的稀释倍数作为中和抗体滴度.以参考株HB29检测,自然感染者的中和抗体滴度在1∶100～1∶43000之间,不同基因型DNA疫苗免疫后的中和抗体在1∶100～1∶2 500之间.不同基因型和突变体对DNA疫苗免疫的豚鼠血清以及自然感染者血清的中和抗体检测差异无统计学意义.结论 各基因型和突变体的中和特性未发现明显改变,对疫苗毒株的选择具有重要参考价值.

摘要： 通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3上.采用PCR定点突变技术,将其HA基因裂解位点的氨基酸组成由RKKR↓GLF突变为RSSR↓GLF,使其具有低致病性AIV的分子特征,并构建了表达突变后HA基因的真核表达载体pcDNA-Hm.将pcDNA-H5和pcDNA-Hm分别与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的人胚肾细胞293T后,收集转染细胞上清,通过Western-blot和细胞感染性实验来研究假病毒的特性.用缺乏囊膜蛋白和已经证实可以形成MuLV假病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G作为对照.转染后形成假病毒进行裂解后进行Western-blot证明两种HA蛋白都能够整合到各自的假病毒颗粒表面,野生型的HA可以检测到三条带,分别与HA0、HA1和HA2大小相符,而突变后的HAm则仅能检测到一条带,与HA前体大小相符,说明其失去了裂解活性.通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后发现野生型的HA所形成的假病毒MuLV-H5具有感染性且具有泛嗜性,而突变后的HA所形成的假病毒则失去了感染性.因此,可以得出HA蛋白裂解位点的氨基酸组成不仅对禽流感病毒的致病性有影响,对禽流感病毒侵入细胞也具有至关重要的作用.

摘要： 通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒完整的HA基因并进行了克隆与序列分析.扩增的HA基因开放性阅读框架由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸.HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF,含连续的碱性氨基酸,具有高致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征.进一步构建了真核表达载体pcDNA-HA,通过与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的293T细胞,收集假病毒上清,通过Western-blot证明HA蛋白能够整合到假病毒颗粒表面,通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后均能检测到Lac Z基因的表达,证实所构建的假病毒具有泛嗜性,能够进入细胞.成功构建了具有感染性的MuLV-HA假病毒体系,为研究鹅源禽流感病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法.

摘要： 外来人兽共患病(以下简称外来病)是指已在国外发生或流行,但中国尚未出现的人兽共患的传染性疾病.各种外来病中,病毒性疾病占据相当比例,对人和动物的健康以及公共卫生安全造成极大的危害.如今在全球一体化的形势下,国际交流日益频繁,人类以及各种动物产品可借助多种交通工具在全球范围内广泛流动,从而为各种外来病传入中国创造了条件.

摘要： 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的EO、E2、E012基因并进行了克隆与鉴定,构建7真核表达载体pcDNA-EO,pcDNA-E2,pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假病毒上清,将假病毒上清超速离心后用抗CSFV的多抗通过Western-blot证明E012蛋白能够在假病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面,用其感染宿主细胞,48h后检测发现标记基因LacZ能有效表达,证实构建的CSFV假病毒具有感染性.本研完成功构建了具有感染性的MuLV-E012假病毒,为研究猪瘟病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法.

摘要： 利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSV ORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低.将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Western blot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面.将整合PRRSV E蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒粒子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLV-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高.

摘要： 通过RT-PCR反应获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3上,通过转染293T细胞进行了瞬时表达验证.采用PCR定点突变技术,将其HA基因裂解位点的氨基酸组成由RKKR↓ GLF突变为RSSR ↓ GLF,使其具有低致病性AIV的分子特征,并构建了表达突变后HA基因的真核表达载体pcDNA-Hm.将pcDNA-H5和pcDNA-Hm分别与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的人胚肾细胞293T后,收集转染细胞上清,通过Western-blot和细胞感染性实验来研究假病毒的特性.用缺乏囊膜蛋白和已经证实可以形成MuLV假病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G作为对照.转染后形成假病毒进行裂解后进行Western-blot证明两种HA蛋白都能够整合到各自的假病毒颗粒表面,野生型的HA可以检测到三条带,分别与HA0、HA1和HA2大小相符,而突变后的HAm则仅能检测到一条带,与HA前体大小相符,说明其失去了裂解活性.通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后发现野生型的HA所形成的假病毒MuLV-H5具有感染性且具有泛嗜性,而突变后的HA所形成的假病毒则失去了感染性.因此,可以得出HA蛋白裂解位点的氨基酸组成不仅对H5亚型禽流感病毒的致病性有影响,对禽流感病毒侵入细胞也具有至关重要的作用.

摘要： 目的构建化因子受体CCR反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法用RT-PCR从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得目的基因,并以正.反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.重组载体用脂质体转染剂(lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(FQ-PCR)测定假病毒滴度,进一步感染NIH/3T3细胞.结果CCR正、反义RNA的真核表达载体,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/313细胞,目的基因在该细胞中得到整合与表达.结论从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达,为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础.

摘要： 双报告基因骨架载体，包括双报告基因骨架载体，其双报告基因选自荧光素酶和荧光蛋白，荧光蛋白报告基因优选mGFP基因，荧光素酶报告基因优选Fluc基因；双报告基因四质粒假病毒包装系统包括双报告基因骨架载体以及分别整合慢病毒gag‑pol基因、慢病毒rev基因以及含有目的病毒的包膜蛋白基因的3种真核表达包装质粒；包装新冠肺炎假病毒包括双报告基因四质粒假病毒包装系统、宿主细胞，所述宿主细胞优选自293T‑hACE2细胞。本发明对SARS‑CoV‑2进行具体实施，可快速包装出单周期感染且安全性更高的假病毒，可用于SARS‑Cov2等冠状病毒的研究，为抗病毒制剂和疫苗的评价提供了有力的筛选工具,具备广泛的应用价值。

摘要： 一种H7N9假病毒的制备方法及该H7N9假病毒的应用，属于生物医药技术领域。它是将H7N9禽流感病毒的HA，NA基因序列克隆至哺乳动物表达载体pVAX‑1，然后用pVAX‑HA，逆转录病毒载体pNL‑4.3.luc.E‑R‑等质粒共转染293T细胞产生H7N9假病毒颗粒。利用H7N9假病毒及假病毒细胞模型筛选抑制H7N9禽流感病毒进入细胞抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，利用H7N9假病毒进行流感病毒中和抗体的研究，利用H7N9假病毒作为抗流感免疫制剂预防和治疗流感病毒感染。

摘要： 本发明涉及登革病毒和日本脑炎病毒嵌合假病毒颗粒疫苗及其制备方法。所述的嵌合假病毒颗粒是将克隆了登革病毒和日本脑炎病毒结构基因的重组表达质粒转染到靶细胞中表达而得到的。所述的嵌合假病毒制备方法包括1)含有登革病毒和日本脑炎病毒结构蛋白编码序列的重组表达质粒的构建；2)将重组质粒导入靶细胞并进行稳定转染细胞克隆的筛选；3)培养稳定转染的细胞，从而产生登革病毒和日本脑炎病毒嵌合假病毒颗粒；4)从细胞培养上清中提取并纯化嵌合假病毒颗粒。该疫苗嵌合了登革病毒和日本脑炎病毒的抗原组分，可以刺激机体产生免疫应答，进而预防登革病毒和/或日本脑炎病毒感染性疾病，具有免疫效果好、安全、适于产业化生产的优点。

摘要： 一种冠状病毒假病毒的包装系统，包括Fluc、EGFP双报告基因置换GP基因的水泡性口炎病毒VSV载体、表达冠状病毒刺突蛋白S的装配细胞，所述双报告基因选自荧光素酶和荧光蛋白，荧光素酶报告基因优选Fluc基因；上述包装系统采用一步法包装方法可快速包装出单周期感染、低背景值、高滴度、相较于慢病毒介导的假病毒系统具备检测快速特性的假病毒，可用于COVID‑19(SARS‑CoV‑2)、SARS(SARS‑CoV)、MERS等冠状病毒及其他病毒的研究；上述假病毒可通过病毒污染分布模型、搭建场景、取样检测的步骤的评估消杀剂效力，为消杀剂的评价提供安全、便捷、有效的工具方法，具备广泛的应用价值。

摘要： 本发明涉及用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法。包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒，分别命名为pEGFP‑CV‑B5(417)质粒和pCVB3‑复制子，pEGFP‑CV‑B5(417)质粒表达的CV‑B5结构蛋白在细胞中可以包装pCVB3‑复制子转录的CV‑B3亚基因组RNA，从而产生CV‑B5假病毒，该假病毒可以用来检测中和抗体，由于采用了单周期感染的假病毒，所以没有使用活病毒时的安全问题。经过多个试验，其结果表明本发明公开了一种安全，灵敏，快速，特异，简便且成本低廉的检测CV‑B5中和抗体的方法。基于以上特点，本发明非常适合于快速，大规模地检测中和抗体的试验，对于病毒疫苗的研制及检测患者个体及人群CV‑B5特异性中和抗体水平有着重要的应用价值。

摘要： 双报告基因骨架载体，包括双报告基因骨架载体，其双报告基因选自荧光素酶和荧光蛋白，荧光蛋白报告基因优选mGFP基因，荧光素酶报告基因优选Fluc基因；双报告基因四质粒假病毒包装系统包括双报告基因骨架载体以及分别整合慢病毒gag‑pol基因、慢病毒rev基因以及含有目的病毒的包膜蛋白基因的3种真核表达包装质粒；包装新冠肺炎假病毒包括双报告基因四质粒假病毒包装系统、宿主细胞，所述宿主细胞优选自293T‑hACE2细胞。本发明对SARS‑CoV‑2进行具体实施，可快速包装出单周期感染且安全性更高的假病毒，可用于SARS‑Cov2等冠状病毒的研究，为抗病毒制剂和疫苗的评价提供了有力的筛选工具,具备广泛的应用价值。

摘要： 一种H7N9假病毒的制备方法及该H7N9假病毒的应用，属于生物医药技术领域。它是将H7N9禽流感病毒的HA，NA基因序列克隆至哺乳动物表达载体pVAX-1，然后用pVAX-HA，逆转录病毒载体pNL-4.3.luc.E-R-等质粒共转染293T细胞产生H7N9假病毒颗粒。利用H7N9假病毒及假病毒细胞模型筛选抑制H7N9禽流感病毒进入细胞抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，利用H7N9假病毒进行流感病毒中和抗体的研究，利用H7N9假病毒作为抗流感免疫制剂预防和治疗流感病毒感染。

摘要： 本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体涉及狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用。本发明提供的重组狂犬病病毒载体为包含重组狂犬病病毒基因组DNA表达盒的哺乳动物表达质粒；所述表达盒包含重组狂犬病病毒基因组DNA和调控元件。由该重组狂犬病病毒载体拯救获得狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒具有较高的拯救效率，制备的假病毒为复制增殖型假病毒，在体外培养过程中能够进行复制增殖并获得较高的病毒滴度，可作为沙粒病毒和丝状病毒野毒的替代物，用于检测沙粒病毒和丝状病毒的中和抗体及其效价，安全性较高且能够实现便捷的荧光可视化检测。

摘要： 一种利用可诱导表达狂犬病病毒蛋白的稳定细胞系生产狂犬病病毒假病毒系统的方法，包括：表达狂犬病病毒GP蛋白重组质粒的构建；重组质粒通过慢病毒三质粒或四质粒系统转染进HEK293T细胞内进行慢病毒包装得到慢病毒Lenti‑TRE‑RABV；将携带Tet‑ON基因的慢病毒感染宿主细胞筛选后得到表达Tet‑ON基因的细胞系；Lenti‑TRE‑RABV转染表达Tet‑ON基因的细胞系筛选后得到可诱导表达狂犬病病毒GP蛋白的细胞系；狂犬病病毒假病毒的包装生产。本发明生产的狂犬病病毒假病毒与天然狂犬病病毒结构相似，具有病毒批间差异小、稳定性好、病毒滴度高、具备规模化生产能力等特点，可应用于狂犬病病毒中和抗体检测、评价，疫苗研发及药物筛选等领域。

摘要： 本发明涉及登革病毒和日本脑炎病毒嵌合假病毒颗粒疫苗及其制备方法。所述的嵌合假病毒颗粒是将克隆了登革病毒和日本脑炎病毒结构基因的重组表达质粒转染到靶细胞中表达而得到的。所述的嵌合假病毒制备方法包括1)含有登革病毒和日本脑炎病毒结构蛋白编码序列的重组表达质粒的构建；2)将重组质粒导入靶细胞并进行稳定转染细胞克隆的筛选；3)培养稳定转染的细胞，从而产生登革病毒和日本脑炎病毒嵌合假病毒颗粒；4)从细胞培养上清中提取并纯化嵌合假病毒颗粒。该疫苗嵌合了登革病毒和日本脑炎病毒的抗原组分，可以刺激机体产生免疫应答，进而预防登革病毒和/或日本脑炎病毒感染性疾病，具有免疫效果好、安全、适于产业化生产的优点。