沙门菌外膜蛋白D的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

目的:在大肠杆菌中表达沙门菌外膜蛋白(OMP)D,纯化后制备兔抗OMP D抗体.方法:用PCR方法从鼠伤寒沙门菌中扩增出omp D基因,并插入融合表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET28a(+)-omp D;以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化;以表达的OMP D蛋白免疫家兔,制备抗OMP D的多克隆抗体并进行鉴定.结果:扩增了omp D基因,测序证实正确后亚克隆于表达载体pET-28a(+)中,经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量为40×103的目的蛋白并进行纯化;纯化的OMP D免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1:10 000以上,且具有良好的特异性.结论:构建omp D基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗OMP D抗体,效价及特异性均良好,为进一步制备肠黏膜高亲和力疫苗奠定了基础.