鲤春病毒血症病毒外膜蛋白G和基质蛋白M的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

鲤春病毒血症是一种急性、出血性传染病,具有较高的致死率,已给多国的鲤鱼养殖业带来严重的经济损失。其病原为鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of CarpVirus,SVCV),隶属于弹状病毒科水泡性病毒属。我们根据SVCV基因组序列(GenBank:NC002803),人工合成了该病毒的两种主要结构蛋白的开放性阅读框序列—G蛋白基因序列和M蛋白基因序列,克隆至pMD19-T载体,经酶切、测序验证后,再将其克隆至原核表达载体pET-32aq(+),转化表达菌株BL21(DE3),经表达条件的优化,在0.1mmol/IPTG,37℃条件下诱导5-6h,可实现G蛋白和M蛋白的高效表达,但二者均主要以包涵体的形式存在,分别以割胶回收、His亲和纯化的方法获得纯化的G蛋白和M蛋白。将纯化的蛋白分别免疫新西兰大白兔,制备了这两种结构蛋白的兔抗多克隆血清；ELISA检测显示,G蛋白兔抗血清的效价高达1:2560000,而M蛋白的兔抗血清效价为1:64000。Western blot分析表明,G蛋白的兔抗血清与细胞培养的SVCV蛋白反应时有两条特异性反应条带,这可能与G蛋白的表达后剪切有关；M蛋白的兔抗血清可特异性的识别SVCVM蛋白。本研究为进一步开发SVCV的免疫诊断技术及G基因和M基因的功能研究提供了重要理论基础。