肠出血性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统ATP水解酶escN基因突变株的构建

摘要

目的:利用λ噬菌体的Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的Ⅲ型分泌系统ATP水解酶EscN,构建大肠杆菌escN基因缺失突变株.方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别酶切连接于pUC19-kan质粒上,PCR获得中间嵌合卡那霉素抗性基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒pKD46和pCP20介导的重组技术敲除escN基因,并去除抗性标记;PCR及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生菌株的生长曲线.结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的escN基因,突变株与野生株的生长曲线相近.结论:构建了Ⅲ型分泌系统缺陷菌株,为进一步研究Ⅲ型分泌系统因子在肠出血性大肠杆菌致病过程中的作用奠定了基础.