聚乙烯吡咯烷酮无胶筛分毛细管电泳法分离鉴定DNA片段

摘要

目的在非涂层无胶筛分毛细管电泳中探讨一种简便快捷的分离鉴定DNA片段的新方法,以期更好的用于基因诊断.方法在非涂层无胶筛分毛细管电泳中,以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为筛分介质,用pUC19DNA/Mspl(HpaⅡ)标准DNA片段为实验对象,通过调节分离缓冲液中筛分介质的浓度、电泳缓冲液的pH值、运行电压及毛细管的温度,优化出分离26～501 bp DNA片段的最适条件.在此条件下分离了Y染色体无精症因子(AZF)区域4个位点的多重聚合酶链反应(PCR)扩增产物.结果 PVP作为筛分介质在非涂层无胶筛分毛细管电泳中对于长度<501 bp的短链除了110和111 bp外均获得良好的分离效果,且迁移时间与碱基对数目呈良好线性关系.不但对多重PCR扩增产物实施了好的分离,而且依据碱基对数目与迁移时间之间的线性关系,对其大小也进行了精确的推断.结论 PVP是一种良好的筛分介质,运用其进行无胶筛分毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏.