重组PEDF腺病毒载体的构建及其抗膀胱癌效应的研究

摘要

目的 利用腺病毒载体系统构建视网膜色素上皮衍生因子(Pigment epithelium-derived factor, PEDF)的重组腺病毒载体,并观察其对膀胱癌细胞J82 的杀伤作用.方法 将PEDF cDNA 克隆入pENTR-TOPO中,通过同源重组接入腺病毒载体,用脂质体转染入人胚肾293细胞中,包装获得重组腺病毒Ad-PEDF.将重组腺病毒颗粒体外感染J82细胞后,检测细胞活力和细胞凋亡,并在软琼脂中测定克隆形成能力.将感染装有PEDF 基因的病毒的J82细胞注入裸鼠皮下,观察PEDF 的抑瘤能力.结果 免疫印迹法(Western blot)证实感染PEDF 腺病毒的J82细胞中有PEDF 蛋白的正确表达.将重组腺病毒颗粒体外感染J82,能以剂量依赖的方式抑制细胞活力;流式细胞术检测凋亡细胞明显多于对照组;软琼脂试验显示感染PEDF后能抑制克隆的形成. 感染PEDF腺病毒的膀胱癌细胞在裸鼠皮下形成的种植瘤的体积与感染对照病毒的种植瘤相比有显著减小.结论 PEDF 能抑制膀胱癌细胞的生长,具有潜在的治疗作用.