大鼠PEDF基因的克隆及腺病毒表达载体的构建

摘要

目的 构建PEDF基因腺病毒表达载体,为基因治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)奠定基础.方法 从大鼠视网膜组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PEDF基因cDNA,并将回收的PEDF基因克隆入质粒pGEM-Teasy载体中,亚克隆入腺病毒表达载体质粒pDC316中,DNA序列分析加以证实.利用腺病毒Admax系统,通过含有目的基因片段PEDF的穿梭载体pDC316/PEDF和病毒骨架质粒共转染293细胞的方法包装出重组腺病毒AdPEDF.Western Blot对重组腺病毒进行鉴定.结果 基因测序表明PEDF基因包含了大鼠PEDF基因阅读框内的全部序列,与NCBI Sequence Viewer中公布的大鼠PEDF mRNA序列(NM-177927)完全一致.获得了表达PEDF蛋白的重组腺病毒.结论 成功构建了PEDF基因腺病毒表达载体,为进一步研究基因治疗脉络膜新生血管奠定了基础.