猪白细胞介素18基因的克隆及其腺病毒表达载体的构建

摘要

根据GenBank中收录的猪白细胞介素18(porcine interleukin18，pIL-18)基因序列，设计了1对特异性引物。运用RT-PCR技术从经刀豆素(Con A)诱导的大约克猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到了pIL-18基因，并将其克隆至pGEM-T Easy载体上。核苷酸测序结果显示，获得的基因序列全长为579 bp的开放阅读框，编码192个氨基酸，与已知pIL-18核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100％。将克隆的猪IL-2基因编码阅读框克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV，电转化含腺病毒基因组(Adeasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-AD-1，成功获得了重组腺病毒DNA，将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞，经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定，初步表明获得了表达猪白细胞介素2的重组腺病毒。