革兰阴性杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测及作用研究

摘要

目的 分析上海中医药大学附属普陀医院临床分离的革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况及革兰阴性杆菌的氨基糖苷类耐药机制.方法 收集临床分离的对阿米卡星和/或庆大霉素耐药的革兰阴性杆菌53株.采用聚合酶链反应(PCR)法检测16S rRNA甲基化酶基因:armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;PCR阳性产物测序分析.构建PET32-armA和PET32-rmtB的重组质粒并转化入宿主菌BL21中.纸片扩散法(K-B)检测临床分离16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株和重组菌对5种氨基糖苷类药物的敏感性.结果 53株耐药菌中5株鲍曼不动杆菌、2株肺炎克雷伯和1株阴沟肠杆菌检出armA基因,2株大肠埃希菌检出rmtB基因.获得PET32-armA和PET32-rmtB的重组BL21菌株.PET32-armA和PET32-rmtB的重组菌均获得氨基糖苷类抗菌药物耐药性.结论 本院临床样本检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株,armA基因存在于鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌中.将armA和rmtB基因转入非耐药的宿主菌中可以诱导其对氨基糖苷类抗菌药物的耐药.