细胞色素P4502 A13野生型/突变体稳定表达Flp-InTM CHO细胞系的建立

摘要

目的:构建稳定表达细胞色素P4502A13(CYP2A13)野生型(CYP2A13?1)和5种突变体的Flp-InTM CHO细胞系.方法:构建CYP2A13野生型、各突变体的pcDNA5/FRT重组质粒.将pcDNA5-CYP2A13?1、?2、?5、?6、?8和?9重组质粒分别转染至Flp-InTM CHO细胞中,用实时荧光定量PCR、Western blot和黄曲霉毒素B1(AFB1)细胞毒性实验检测转染细胞中CYP2A13表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13野生型和各突变体的Flp-InTM CHO细胞.结果:和转染pcDNA5/FRT空质粒的Flp-InTM CHO细胞相比,转染各CYP2A13野生型和各突变体的CHO细胞中CYP2A13 mRNA和蛋白表达水平增加,对AFB1毒性敏感度增加(P<0.05).结论:成功建立了稳定表达CYP2A13?1、?2、?5、?6、?8和?9 Flp-InTM CHO细胞系.