稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3 T3细胞系的建立及其生长特性

摘要

目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系.方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系.用RT-PCR、免疫印迹法检测转染细胞polβ mRNA和POLB蛋白的表达水平,MTT法测转染细胞生长曲线,免疫组化法测增殖细胞核抗原(PCNA),并用流式细胞仪测细胞周期.结果与结论:成功建立了稳定表达野生型及突变型polβ的NIH3T3细胞系.野生型polβ对NIH3T3细胞生长无明显影响,突变型polβ则使NIH3T3细胞生长速度加快,细胞周期发生改变,细胞多被阻滞在S期.