化学—酶法合成胸苷的研究

摘要

核苷及其衍生物在抗肿瘤、抗病毒方面具有广泛应用,如何高效绿色合成核苷一直是研究的重点.现以1-氯-2-脱氧-3',5'-二-o对氯苯甲酰基-D-核糖(化合物Ⅰ)为起始原料,采用结晶诱导不对称转化技术合成中间体2-脱氧-α-n核糖-1-磷酸二环己胺盐(化合物Ⅲ),然后以化合物Ⅲ和胸腺嘧啶作为底物,利用大肠杆菌(Escherichia coli)核苷磷酸化酶的催化作用合成胸苷.结果显示:化学法合成化合物Ⅲ获得较高的收率,可达到84.9％,纯度为94.7％;最佳生物酶催化反应条件:底物浓度为化合物Ⅲ100 mmol/L,胸腺嘧啶400 mmol/L;菌体量为80 g/L;缓冲液pH 8,反应温度55℃,反应时间4h,转化率达到61.8％.最后,采用柱层析法分离得到胸苷,收率和纯度分别为49.7％和95.3％.该方法具有高选择、高效性及少污染的优点.