POLH基因反义阻断细胞系的建立及POLH在MNNG引起的非定标性突变中的作用

摘要

目的:通过建立POLΗ反义阻断细胞系FL-POLΗ-,研究POLΗ的功能.方法:将POLΗ基因的1473～2131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体pMAMneo-amp-中,将重组表达质粒转染FL细胞,G418筛选,获得POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系FL-POLΗ-.采用穿梭质粒pZ189介导的突变实验,观察在POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和MNNG引起的诱发突变频率.结果:成功建立细胞系FL-POLΗ-.穿梭质粒pZ189在FL-POLΗ-细胞中复制后,其SupF tRNA基因的自发突变频率为13.5×10-4,而对照细胞FL和FL-M分别为4.9×10-4和3.7×10-4 .同时,质粒在接触过MNNG的FL-POLΗ-细胞中复制,其SupF tRNA基因的非定标性突变频率不发生.结论:POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用,且参与哺乳动物细胞中MNNG引起的非定标性突变.