重组质粒pFastdual-polh-da26-Asp、家蚕杆状重组病毒及利用该病毒生产L-天冬酰胺酶Ⅱ的方法

摘要

本发明涉及利用杆状病毒重组系统在家蚕细胞及家蚕体内融合表达大肠杆菌天冬酰胺酶的方法。本发明将da26和Asp以相同酶切位点的核苷酸连接构建成融合基因，将其克隆至含有双启动子的pFastdual载体，同时将polh克隆至多角体启动子下形成新的重组质粒。通过转移载体同源重组，形成含有da26和Asp融合表达的重组Bacmid，通过转染家蚕细胞后获得重组病毒。da26表达的BV/ODV-E26是来源于BmNPV的一种包膜蛋白，可以与外源基因表达的蛋白紧密结合，通过超声裂解和差速离心法将外源蛋白分离纯化。这种表达系统不仅可以获得更多的Asp，而且由于BV/ODV-E26可以吸附在BmNPV形成的多角体颗粒的表面，通过离心纯化多角体后，就可以获得融合表达产物da26-Asp，再通过洗脱，把融合蛋白洗脱下来，简化了纯化的流程。