tBHQ和Sulforaphane对Caco2细胞Nrf2-ARE信号通路的影响

摘要

目的:研究抗氧化性诱导剂(激活剂)叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)和莱菔硫烷[1-异硫氰酸-(4R,S)-(甲基亚磺酰基)丁烷](sulforaphane,SFN)对人结肠癌细胞株Caco2的Nrf2-ARE信号通路的影响.方法:选取不同的时间点,分别用20 μmol/L tBHQ和5 μmol/L SFN处理Caco2细胞,从蛋白质水平、mRNA水平和蛋白质定位3个方面,分别用Western blotting、real-time PCR和免疫荧光染色(immunoflourescence staining,IF)方法来检测Nrf2以及其调控基因AKR1C1和NQO1(Western blotting,real-time PCR)表达的变化.结果:细胞核中Nrf2基因表达的最佳时间点为加药诱导后8 h,细胞质中Nrf2调控基因AKR1C1和NQO1表达的最佳时间点为加药诱导后16 h.tBHQ的诱导作用在撤去之后仍能持续4 h.结论:本研究使用激活剂tBHQ和SFN对Caco2细胞的Nrf2-ARE信号通路进行诱导,取得了最佳的诱导时间点,并研究了撤去tBHQ后持续诱导时间,为今后在肿瘤化学预防研究中,筛选合适的激活剂及其剂量和使用次数提供了重要依据,也为研究Nrf2-ARE信号通路的抑制剂提供了重要信息.