山奈酚在HepG2和CaCo2细胞中对MDR1表达的影响以及该影响与PXR之间的关系

摘要

背景：P糖蛋白由MDRl基因编码，它是人体药物处置中最重要的转运体，其过度表达是造成多药耐药的主要原因。大量研究表明，P糖蛋白与肝脏CYP3A4代谢酶组织分布相似，且有很多相同的底物。许多CYP3A4的诱导剂同时能够诱导P糖蛋白的表达。有报道，山奈酚能够通过活化PXR诱导CYP3A4的转录表达。 目的：本课题旨在mRNA水平上研究山奈酚对MDRl表达的影响，并通过瞬时共转染报告基因实验探讨PXR在其中所起到的作用。 方法：分别用0.001 μM、0.01μM、0.1μM、1 μM、5μM、10 μM、20 μM、50μM的山奈酚处理HepG2和CaCo2细胞，并选取20 μM的山奈酚在不同时间下处理CaCo2细胞，用Real-Time PCR方法检测其MDRl mRNA表达；构建PXR瞬时共转染报告基因系统，分别用0.1μM、1μM、10μM、20μM、50μ M的山奈酚处理转染后的HepG2和CaCo2细胞，用双荧光素酶法测得MDRl启动子的荧光活性。 结果：10μM、20 μM、50 μM的山奈酚处理HepG2细胞24小时后，细胞MDRl mRNA的表达量明显升高(P<0.05)；5μM、10μM、20μM、50μM的山奈酚处理CaCo2细胞24小时后，细胞MDRl mRNA的表达量显著升高(P<0.05)；20μM的山奈酚分别处理CaCo2细胞12h、24h、48h，细胞MDRl mRNA的表达量明显增加(P<0.05)。在PXR瞬时共转染报告基因系统中，不同浓度山奈酚作用于转染后的HepG2以及CaCo2细胞24小时后，其对MDRl启动子的荧光活性影响无显著意义(P>0.05)。 结论：山奈酚能够诱导MDRl的表达，并在一定的范围内呈现浓度一剂量效应和时间一剂量效应；但其诱导作用并不是通过活化PXR而实现的。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章材料和方法

2.1材料和仪器

2.2实验设计和分组

2.3细胞培养

2.4药物浓度的筛选及加药

2.5总RNA提取和逆转录实验

2.6 Real-Time PCR的操作和数据提取

2.7细胞转染和双荧光素酶报告基因的活性检测

2.8数据处理和统计学分析

第三章实验结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

第七章综述中草药对P糖蛋白调控的研究进展

致谢