蟾毒灵对黑色素瘤A375细胞的作用及其机制研究

摘要

目的 探讨蟾毒灵(Bufalin)对黑色素瘤A375细胞的作用及其机制研究。方法 体外培养黑色素瘤A375细胞,采用CCK-8法检测不同浓度的蟾毒灵对A375细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测和细胞周期分布情况;JC-1法检测蟾毒灵对A375细胞对线粒体膜电位的影响;采用分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3蛋白的活性。结果 不同浓度蟾毒灵(6.25nmol/L、12.5nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L)作用于A375细胞24h、48h和72h后,IC50值分别为107nmol/L、85.18nmol/L、41.62nmol/L,IC50值逐渐下降,实验组与空白对照组比较,随着蟾毒灵浓度的增加和作用时间延长,A375细胞活力均有显著下降,说明蟾毒灵可明显抑制A375细胞增殖,且呈浓度依赖性和时间依赖性;蟾毒灵可显著增加A375细胞凋亡率并阻滞细胞周期于S期;明显降低A375细胞线粒体膜电位;蟾毒灵可明显增加A375细胞内Caspase-9、Caspase-3蛋白的活性。结论 蟾毒灵可抑制黑色素瘤A375细胞增殖,诱导A375细胞凋亡,其作用机制可能与激活Caspase家族有关。