水稻多顺反子质体表达载体的构建

摘要

根据发表的水稻叶绿体基因组序列,对比烟草高频同源重组目标区(NCBI编号:X15901)设计引物,用PCR的方法克隆到一段3.939kb叶绿体DNA片段,命名为crDNA.以其作为外源基因定点整合的同源重组片段,以来自烟草叶绿体的强启动子Prrn、甘露聚糖酶man、绿荧光蛋白gfp、氨基糖苷3'-腺苷酰基转移酶基因aadA和终止子psbA3',构建水稻质体多顺反子表达载体pLM3(-psbCPrrn-SD-man-SD-gfp-SD-aa-dA-psbA3'-trnm-).并在大肠杆菌中通过平板定性对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定,结果表明:在大肠杆菌中,多顺反子盒式表达结构中的三个基因(man,gp,aadA)均得到了表达.