水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化

摘要

[目的]尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达.[方法]根据已发表的相关序列,分别设计引物,通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件:质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子(Prrn)、质体psbA基因3'端终止子(psbA3')、氨基糖苷3'-腺苷酰基转移酶基因(aadA)、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG,大小3362 bp),命名为crDNA、甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp).构建了水稻质体多顺反子定点整合表达载体pLM21(-psbC-Prrn-RBS -man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3'- trnG-).将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选.[结果]获得质体转基因烟草4株.用PCR、激光扫描和Western blot等方法检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达,用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中.[结论]水稻质体多顺反子定点整合表达载体已整合到烟草质体基因组中,并得到表达.