一种多顺反子表达载体构建方法

摘要

一种多顺反子表达载体构建方法，利用商品化T-载体作为中间载体，设计两对引物，在引物中引入NheI和SpeI酶切位点及核糖体结合位点(RBS)，将扩增产物与T-载体相连，所得重组T-载体用NdeI+NheI、NdeI+SpeI双酶切，得到的DNA片段用DNA连接酶连接，就能使单个异源基因以2n-1(n为上一步重组T-载体含目的基因个数)的方式在T-载体上递增。最后将含多个异源基因的DNA片段，通过对应于其两端酶切位点的限制性内切酶切下，亚克隆到表达载体启动子下游，即可得到多顺反子表达载体。本发明操作简单，适用范围广，适用于所有蛋白，特别是小肽的表达。构建的表达载体可直接转化原核宿主细胞，可为解决蛋白质原核基因工程表达中表达量低的瓶颈问题提供技术平台。