内质网应激对肝癌细胞硼替佐米耐药性的影响

摘要

目的 探讨内质网应激对肝癌细胞硼替佐米耐药性的影响.方法 将对数生长期HepG2和HuH7细胞分别分为0、5、10、15、20、30 nmol·L-1硼替佐米组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测硼替佐米干预24 h时各组细胞存活率及干预24、48、72、96 h时细胞增殖率.将对数生长期HepG2和HuH7细胞分别分为0、10、15 nmol·L-1硼替佐米组,采用Western blot法检测HepG2和HuH7细胞中凋亡相关蛋白切割片段的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF-2α)、激活转录因子4(ATF4)的表达.构建对硼替佐米耐药的HepG2细胞株(HepG2/Bort细胞),通过抑制生长曲线计算细胞的半抑制浓度(IC50),并计算细胞耐药指数(RI).将HepG2/Bort细胞分为对照组、硼替佐米组(给予15 nmol·L-1硼替佐米干预)、硼替佐米+4-苯基丁酸(4-PBA)组(给予15 nmol·L-1硼替佐米和8 mmol·L-14-PBA干预)、硼替佐米+牛磺脱氧胆酸(TUDCA)组(给予15 nmol·L-1硼替佐米和1 mmol·L-1 TUDCA干预),药物作用24 h后,采用CCK-8法检测HepG2/Bort细胞存活率,采用Western blot法检测HepG2/Bort细胞中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和内质网应激相关蛋白GRP78、p-eIF-2α、ATF4的表达.结果 硼替佐米干预24 h后,5、10、15、20、30 nmol·L-1硼替佐米组HepG2和HuH7细胞存活率均显著低于0 nmol·L-1硼替佐米组(P0.05);硼替佐米干预48、72、96 h时,5 nmol·L-1硼替佐米组HepG2和HuH7细胞增殖率显著低于0 nmol·L-1硼替佐米组(P<0.05).干预24 h后,10、15 nmol·L-1硼替佐米组HepG2和HuH7细胞内cleaved caspase-3表达显著高于0 nmol·L-1硼替佐米组(P<0.05).HepG2/Bort细胞和HepG2细胞对硼替佐米的IC50分别为122.36、13.23 nmol·L-1,HepG2/Bort细胞对硼替佐米的RI为9.25.HepG2/Bort细胞中GRP78、p-eIF-2α、ATF4蛋白表达量显著高于HepG2细胞(P<0.05).硼替佐米组HepG2/Bort细胞存活率显著低于对照组(P<0.05),硼替佐米+4-PBA组和硼替佐米+TUDCA组HepG2/Bort细胞存活率显著低于硼替佐米组(P<0.05).硼替佐米组HepG2/Bort细胞中cleaved caspase-3相对表达量显著高于对照组(P<0.05),硼替佐米+4-PBA组和硼替佐米+TUDCA组HepG2/Bort细胞中cleaved caspase-3相对表达量显著高于硼替佐米组(P<0.05).结论 硼替佐米可以抑制肝癌细胞增殖,并诱导其凋亡;内质网应激抑制剂可以提高HepG2/Bort细胞对硼替佐米的敏感性,本研究为临床克服肝癌耐药提供了新的治疗策略.