PI3K/Akt通路介导内质网应激诱导肝癌细胞的迁移及侵袭

摘要

目的：探讨内质网应激对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制. 方法：衣霉素(tunicamycin,TM）处理人肝癌细胞系SMMC-7721及HepG2,用Westren blot技术检测内质网应激指标Bip的表达;通过划痕实验及transwell侵袭小室实验检测衣霉素对肝癌细胞转移及侵袭能力的影响,Western blot技术检测衣霉素处理不同时间后,肝癌细胞转移相关指标VEGF-A、MMP-2及MMP-9的表达,以及Akt的表达及其磷酸化情况;内质网应激状态下,用wortmannin阻断Akt的活化,通过Western blot技术检测wortmannin对PI3K/Akt通路的抑制效果,划痕实验及transwell侵袭小室实验检测PI3K/Akt通路受阻对内质网应激诱导肝癌细胞转移及侵袭能力的影响. 结果：Western blot结果显示与相应0h相比，衣霉素处理肝癌细胞SMMC-7721及Hep G2不同时间后，Bip表达量均明显增强。与相应的对照组相比，衣霉素处理SMMC-7721及Hep G2细胞后，划痕实验结果显示其划痕修复率明显增强（P<0.05），transwell侵袭小室实验其穿膜细胞数均明显增多（P<0.05），Western blot证实衣霉素处理SMMC-7721及Hep G2细胞后，VEGF-A及MMP-9表达量均明显增强，Akt磷酸化水平均明显提高，但MMP2及Akt表达量不变。Western blot结果显示wortmannin及衣霉素联合应用后，肝癌细胞Akt的磷酸化水平基本恢复至未加药对照组水平；划痕实验结果显示与衣霉素组比较，wortmannin及衣霉素联合应用后肝癌细胞划痕修复率明显降低（P<0.05），transwell侵袭小室实验结果显示与衣霉素组比较，wortmannin及衣霉素联合应用后肝癌细胞穿膜细胞数明显减少（P<0.05）。 结论：PI3K/Akt信号通路参与内质网应激诱导肝癌细胞的迁移及侵袭。