微RNA-205对帕金森病大鼠脑额叶皮层纹状体多巴胺能神经元凋亡的影响

摘要

目的 探讨微RNA-205(miR-205)通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O3a(FoxO3a)通路对帕金森病(PD)大鼠脑额叶皮层纹状体多巴胺能神经元凋亡的调控作用.方法 将30只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为干预组、阴性对照(NC)组、假手术组,每组10只.干预组、NC组大鼠经脑立体定位仪注射6-羟多巴胺建立PD模型,假手术组大鼠注射等体积的生理盐水.建模成功后24h,干预组和NC组大鼠于纹状体内分别注射miR-205双链寡核苷酸抑制剂(miR-205-inhibitor)及miR-205阴性对照试剂(miR-205-inhibitor-NC)2μL,假手术组大鼠注射等量的磷酸缓冲盐溶液.观察干预1周后大鼠一般情况,比较各组大鼠异常不自主动作(AIM)评分;脱氧核糖核苷末端转移酶介导的缺口末端标记法检测各组大鼠纹状体神经元凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组大鼠纹状体中miR-205及IGF-1、Akt、FoxO3a mRNA表达;Western blot检测各组大鼠纹状体中IGF-1、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、FoxO3a、磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)蛋白表达.结果 干预1周后,假手术组大鼠进食、饮水、活动正常;NC组大鼠进食、进水、活动减少,活动时动作缓慢或姿势异常,部分有易激惹、狂躁、自残行为;干预组大鼠上述症状轻于NC组.NC组、干预组大鼠AIM评分和神经元凋亡率均显著高于假手术组(P<0.001);干预组大鼠AIM评分和神经元凋亡率显著低于NC组(P<0.001).NC组、干预组大鼠纹状体中miR-205mRNA相对表达量显著高于假手术组(P<0.001),干预组大鼠纹状体中miR-205mRNA相对表达量显著低于NC组;NC组、干预组大鼠纹状体中IGF-1mRNA相对表达量显著低于假手术组(P<0.001),干预组大鼠纹状体中IGF-1mRNA相对表达量显著高于NC组(P<0.001);3组大鼠纹状体中Akt、FoxO3a mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).NC组、干预组大鼠纹状体中IGF-1蛋白相对表达量及p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a显著低于假手术组(P<0.001);干预组大鼠纹状体中IGF-1蛋白相对表达量及p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a显著高于NC组(P<0.001).结论 通过抑制大鼠脑额叶皮层纹状体中miR-205表达可抑制多巴胺能神经元凋亡,改善PD症状,其机制可能与上调IGF-1表达及p-Akt、p-FoxO3a水平有关.