MIP-3α-SA双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定

摘要

目的:制备链亲合素(SA)连接的MIP-3α融合蛋白MIP-3α-SA,并研究其生物学活性及功能。方法:构建MIP-3α-SA-pET21重组表达载体,在大肠杆菌中诱导表达MIP-3α-SA融合蛋白,经镍金属螯合(Ni-NTA)层析纯化,尿素梯度透析复性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、Western blot及银氨染色法鉴定融合蛋白;通过体外淋巴细胞趋化实验验证其趋化活性,流式细胞术分析其对已生物素化的小鼠前列腺癌RM-1细胞的表面锚定修饰效率。结果:MIP-3α-SA融合蛋白可在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效诱导表达,表达量占细菌总蛋白量的30%。经镍柱亲和层析纯化后该融合蛋白纯度达到95%。经尿素梯度复性后,验证该融合蛋白具有双重活性,即:MIP-3α介导的对人淋巴细胞的趋化作用且呈剂量依赖性,及SA介导的高效结合至表面已生物素化的小鼠前列腺癌RM-1细胞的功能(表面锚定修饰效率大于95%)。结论:MIP-3α-SA双功能融合蛋白具有双重活性,为MIP-3α表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制奠定基础。