Tumstatin_(183-230)-TRAIL融合蛋白的克隆表达及其生物学双功能鉴定

摘要

目的:克隆表达融合蛋白Tumstatin_(183-230)-TRAIL,并观察其生物学功能。方法:利用重组PCR技术扩增Tumsta- tin_(183-230)-TRAIL(Tu-T)的融合编码序列.构建pMAL—Tu—T融合蛋白表达载体,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,得到MBP—Tu—T融合蛋白.用SDS-PAGE鉴定纯化的表达产物。通过体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞杀伤实验、体外管腔形成抑制试验及电镜检测细胞凋亡情况对其生物学双功能进行鉴定。结果:融合蛋白MBP—Tu—T在BL21中表达率约20%.可明显抑制内皮细胞增殖(IC_(50)12.5μg/ml),杀伤、诱导胰腺癌细胞凋亡并抑制体外管腔形成。结论:融合蛋白MBP-Tu-T具有双功能生物学活性,为进一步研究其靶向性杀伤肿瘤奠定了基础。