高纯度烟草过氧化物酶的酶学特性研究

摘要

从K326的烟叶中采用除植物褐色素新技术,经分离纯化,得到单一过氧化物酶Ⅰ(TOPⅠ),该酶是一种以血红素为辅基的含铁蛋白质.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)测得TOPⅠ分子量为21 888.5 Da,等电点pI为3.5;酶反应的最适pH为6.0,最适温度为45℃,70℃保温15 min残余活力为50%,具有良好的热稳定性.动力学分析表明:烟草中的过氧化物酶Ⅰ与愈创木酚(一元酚)结合力最强,邻苯二酚(二元酚)次之,焦性没食子酸(三元酚)作用较小.TOPⅠ的Km(愈创木酚)为0.132 mmol/L;Km(H2O2)为0.598 mmol/L.N3-、CN-1、Fe3+、Fe2+和Sn2对酶有较强烈的抑制作用,重金属离子Ag+、Pb2+、Cu2+对该酶的活性有激活作用,而NO2-、Hg2+、Cr3+对酶活力无显著影响.