ИЗУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОЙ ФОСФОЛИПИДГИДРОПЕРОКСИД-ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ ИЗ РАСТЕНИЯ MOMORDICA CHARANTIA, А ТАКЖЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЕЕ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ IN VIVO В КЛЕТКАХ ДРОЖЖЕЙ

摘要

Ген МсФГГП, кодирующий фосфолипидгидропероксид-глутатионпероксидазу из Momordica charantia (МсФГГП), клонирован в составе вектора pET-28a(+) и экспрессирован в Escherichia coli BL21 (DE3). Отмечено, что очищенный рекомбинантный фермент (рекМсФГГП) обладает высоким сродством к фосфолипидгидропероксиду (ФГП) и с высокой скоростью катализирует реакцию его восстановления. Помимо этого он проявляет каталитическую активность по отношению и к другим субстратам - H_2O_2 и трет-бутилгидропероксиду в ряду т-БГП < H_2O_2 < ФГП. Установлена оптимальная температура для протекания ферментативной реакции (40-50°), свидетельствующая о более высокой термостабильности фермента из M. charantia по сравнению с ФГГП из других источников. Обнаружено, что при экспрессии гена МсФГГП в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae мутантной ФГГП-дефицитной линии повышалась выживаемость мутантных клеток в условиях стресса, вызванного автоокислением экзогенной полиненасыщенной жирной кислоты (линоленовая кислота). Это свидетельствует о способности МсФГГП к функциональной комплементации в дрожжах. Таким образом, рекомбинантный протеин МсФГГП обладает фосфолипидгидропероксид-глутатионпероксидазной активностью in vitro и in vivo и может быть использован в дальнейшем для изучения функционирования ФГГП растений.