红色荧光-VEGF165融合蛋白载体在细胞内的定位和表达

摘要

目的构建在哺乳动物细胞中表达人VEGF165(hVEGF165)红色荧光蛋白(RFP)的融合表达载体.方法根据已知的人VEGF165序列,用PCR方法,从质粒pUC18/VEGF165中扩增出去除终止密码子的VEGF165片段,定向克隆至pDsRed1-N1质粒中.重组质粒经限制性内切酶和DNA序列测定鉴定.以DOTAP为介导,将pDsVEGF165Red1-N1转染293-T细胞,48小时后用RT-PCR、激光共聚焦显微镜检测VEGF165在细胞内表达和分布情况.结果重组的融合蛋白表达载体经酶切、PCR和DNA序列测定证明构建正确,并在293-T细胞中表达.报告基因-红色荧光蛋白在细胞质、细胞核中都有一定的分布.结论成功构建了pDsVEGF165Red1-N1红色荧光蛋白融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中表达,为研究VEGF的细胞内定位提供了一个重要而方便的工具.