HSP90α通过调控气道上皮细胞内质网应激加重屋尘螨诱导的哮喘气道炎症

摘要

目的 探讨热休克蛋白90(HSP90α)参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞内质网应激的机制。方法 人气道上皮细胞HBE体外培养,由HDM诱导哮喘体外模型,浓度梯度刺激24 h,分为正常对照组;200 U/mL组;400 U/mL组;800 U/mL组。随后分别使用siHSP90α干扰序列转染及HSP90抑制剂17-AAG干预,分为HBE正常对照组、HBE+HDM组(800 U/mL,24 h)、HBE+HDM(800 U/mL,24 h)+siHSP90α(50 nmol,12 h)组、HBE+HDM(800 U/mL,24 h)+17-AAG(900 nmol,6 h)组,测定HSP90α以及内质网应激标志物的表达水平。C57BL/6小鼠由HDM诱导哮喘体内模型,分为正常对照组、17-AAG滴鼻组、HDM滴鼻组、HDM+17-AAG滴鼻组,测定气道炎症水平与内质网应激标志物的表达水平。结果 在HDM诱导的HBE细胞哮喘体外模型中,蛋白电泳结果显示HSP90α(P=0.011)表达上调,琼脂糖凝胶电泳结果显示内质网应激标志物XBP-1(P=0.044)、ATF-6α(P=0.030)和GRP-78(P=0.027)表达水平显著上调;而敲低HSP90α和使用17-AAG会显著抑制HDM诱导的XBP-1(P=0.008)上调;在HDM诱导的哮喘小鼠模型中,相较于HDM组,H&E染色和瑞氏-姬萨姆染色显示HDM+17-AAG组的气道炎症改善,炎症细胞聚集明显减少。肺泡灌洗液计数显示,炎症细胞数量显著减少(P=0.014)。ELISA法显示肺泡灌洗液中炎症因子IL-4(P=0.030)、IL-5(P=0.035)显著降低。免疫组织化学染色显示气道上皮细胞XBP-1和GRP-78表达明显减少。结论 HSP90α加重HDM诱导的哮喘气道炎症,可能通过上调内质网应激实现的。