褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞的异常自噬与凋亡

摘要

目的 探讨褪黑素(MT)对2,2',4,4'-四溴联苯醚(PBDE-47)所致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞异常自噬与凋亡的影响.方法 通过一系列浓度梯度MT(12.5、25、50、100、200μmol/L)预处理PC12细胞2 h后,并联合浓度为20μmol/L的PBDE-47染毒细胞24 h,采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,筛选25μmol/L MT用于后续实验.实验分组为:溶剂对照组(0.5‰DMSO)、20μmol/L PBDE-47处理组、20μmol/L PBDE-47+25μmol/L MT处理组、25μmol/L MT处理组.采用免疫荧光技术检测自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)阳性着色情况;采用Western blot技术检测自噬关键蛋白自噬相关蛋白7(ATG7)、自噬选择性底物p62、LC3-II水平,以及凋亡相关蛋白活化型含半胱氨酸的天冬氨酸-3(active caspase-3)和剪切型多(ADP-核糖)聚合酶(cleaved PARP)水平.结果 CCK8结果表明,PBDE-47处理组细胞活力相比对照组有所下降(P=0.001);与PBDE-47处理组相比,PBDE-47+25μmol/L MT处理组细胞存活率上升且在80％以上,差异均有统计学意义(P=0.023).与对照组相比,PBDE-47处理后PC12细胞LC3蛋白阳性着色增强;此外,PBDE-47处理组PC12细胞ATG7蛋白水平下降,p62、LC3-II、active caspase-3、cleaved PARP蛋白水平上升,差异均有统计学意义(P均<0.001).与PBDE-47处理组相比,PBDE-47+MT处理组LC3蛋白阳性着色减弱;此外,PBDE-47+MT处理组ATG7蛋白水平上升(P=0.034),p62蛋白水平下降(P=0.048),LC3-II蛋白水平下降(P=0.018),active caspase-3蛋白水平下降(P<0.001),cleaved PARP蛋白水平下降(P=0.032).结论 PBDE-47可通过诱导PC12细胞自噬损伤引起自噬体蓄积,并能促进细胞凋亡,从而降低细胞存活;褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞异常自噬与凋亡,进而提高细胞存活.