尿嘧啶DNA糖苷酶防止PCR产物污染及其对核酸杂交的影响

摘要

目的采用PCR微板核酸杂交ELISA技术分析尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG/UDG)防止PCR产物污染及其对PCR扩增效率的影响,探讨在不同A/T含量的微生物中含尿嘧啶的PCR产物对核酸杂交的影响.方法以3组dUTP含量不同的PCR产物作模板,抗污染组用UNG处理,直接进行再次扩增.用微板核酸杂交ELISA检测第二次PCR扩增的结果. 结果抗污染组中以含dUTP的PCR产物作模板,结果为阴性;而以不含dUTP的PCR产物作模板,结果为阳性.非抗污染组全部为阳性.对3组PCR产物再进行核酸杂交无明显差别,且在一定温度内,3组具有同样的稳定性. 结论 UNG能有效降解含dUTP的PCR产物,使之不能作为模板再次扩增,可以有效地防止PCR产物的污染.含有尿嘧啶的PCR产物对寡核苷酸探针的杂交无影响.