酪氨酸羟化酶重组腺病毒在293细胞中的表达及体外活性测定

摘要

目的 构建一种能够携带酪氨酸羟化酶(TH)进入帕金森氏病动物模型体内的重组腺病毒,该病毒能够使TH基因转录并且能够翻译成具有活性的功能蛋白.方法 将TH基因插入穿梭质粒,重组穿梭质粒与腺病毒基因组在BJ-5183中进行同源重组,将重组成功的腺病毒基因组转染293细胞,使其在293细胞中包装出重组腺病毒,RT-PCR和免疫荧光检测目的基因的转录和表达.利用毛细管电泳法检测L-DOPA的生成.结果 成功构建能够表达TH基因的重组腺病毒,RT-PCR能够扩增目的插入片段,毛细管电泳能够检测到L-DOPA的生成.结论 该重组腺病毒能够在体外很好地表达具有活性的酪氨酸羟化酶,为利用该基因对帕金森氏病动物模型进行基因治疗打下基础.