利用基因芯片技术检测BRAF基因在胰腺癌组织中的表达

摘要

目的:研究BRAF基因在正常胰腺与胰腺癌组织中表达的情况.方法:收集正常胰腺组织3例以及胰腺癌手术切除标本6例,后者均经病理学检查证实;用TRizol法对组织进行总RNA抽提,采用无RNA酶的DNA酶Ⅰ等方法进行纯化;通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳以及Lab-on-chip对总RNA进行质控;利用寡核苷酸芯片技术检测正常胰腺和胰腺癌组织中BRAF基因的表达,并且应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术加以验证.结果:总RNA的OD260nm/OD280nm之值在1.8～2.0之间;琼脂糖凝胶电泳18 s和28 s电泳条带清晰,且28 s和18 s亮度之比≥2;Lab-on-chip检测显示18 s和28 s双峰比例及位置均正常,无降解杂峰出现.芯片杂交扫描图像信号清晰,具有较低的整体背景和较高的信噪比;Ratio分析表明,BRAF基因在胰腺癌组织中表达上调(Cy3/Cy5＞2.0).RT-PCR验证了胰腺癌组织中BRAF mRNA表达上调.结论:BRAF基因在胰腺癌组织中表达上调,其在胰腺癌发生发展过程中的作用机制还有待于进一步探讨.