一种改进的漆酶酶活检测方法

摘要

以2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸铵)(简称ABTS)为漆酶A、B的底物,采用UV-2201型紫外-可见分光光度计连续记录酶反应在25 ℃,420 nm波长下的时间历程曲线,并求取最初部分的斜率以计算漆酶酶活的方法.该方法直观﹑方便、准确且可靠.在25℃的0.04 mol/L Britton-Robinson缓冲溶液中,漆酶A、B的最适pH值分别为4.0和4.5.在25℃最适pH值的Britton-Robinson缓冲液中,由双倒数作图法求得漆酶A、B的米氏常数Km分别是6.64×10-5mol/L和2.21×10-5mol/L, 漆酶A、B的最大米氏反应速度Vmax分别是1 425 μmol∕(L·min)和325 μmol∕(L*min).漆酶A、B的酶活分别为2 299 μmol·min-1·L-1和1 148 μmol·min-1·L-1.